PCR检测因其高灵敏度、快速、操作方便等优势已经被广泛应用，不过正是由于它灵敏度极高，极微量的污染源都有可能导致检测结果的假阳性，“假阳性”的出现给疫情防控带来了不小的麻烦。“易查不易察”，污染来的悄无声息，我们该如何应对。如何避免以及处理实验室污染，对PCR人来说是一门必修课。

核酸检测作为是否感染新冠病毒的“金标准”，假阳性到底是如何出现的？

一、常见的四种污染

实验操作过程中造成污染是假阳性产生的原因之一，主要有4个途径：标本间交叉污染、PCR试剂污染、克隆质粒污染和PCR扩增产物污染。

1、样本间交叉污染

主要是在采（取）样的过程中，由于取样工具之间的交叉造成污染；或者在核酸提取的过程中，由于移液器、离心管等使用不当导致的污染。

 ·采集标本的容器被污染；

·标本放置时，容器密封不严；

·还有在不同样本移液时，未更换枪头或未使用带滤芯枪头导致移液器污染等。

2、PCR试剂污染

主要是在 PCR 组分试剂加样过程中，由于移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照污染。

3、PCR扩增产物污染

这是 PCR 反应中最主要、最常见的污染问题。由于PCR产物拷贝量大，产物污染极容易导致假阳性的发生。
还有一种容易被忽视的污染，是能造成PCR产物污染形式的气溶胶污染，而气溶胶造成的污染是一个值得特别重视的问题。在扩增过程中或扩增结束后，PCR管盖未盖严或崩开会导致扩增产物泄露，形成气溶胶。气溶胶扩散到实验室空气中，可能会落到PCR仪，台面，枪头盒等位置，造成污染。

4、克隆质粒污染

在实验操作中会经常用到阳性参考品，这些参考品大多数是由某些克隆质粒制作而成的，质粒在单位容积内浓度高，不小心使用极易造成污染。

二、实验室污染防治

现在新冠结果这么重要，实验室该怎么防污染呢？

PCR实验室防污染有很多措施，首先就是分区设计，严格的PCR实验室应分为：

①试剂储存和准备区

②标本制备区

③扩增区

④扩增产物分析区。

四个区还要单一流向，不能逆行。

可能会有朋友问，全自动仪器不分区怎么防污染呢？

这就涉及到仪器内部通风系统的设置了，这也是核酸检测全自动分析仪设计的难点。我们要保障仪器内部分区设置科学合理，同时控制内部空气从低风险向高风险单向流动，洁污分离，避免交叉污染。

而对于最常见的扩增产物污染，该怎么解决？

其实目前扩增产物的污染并没有想象中这么严重，因为PCR多采用了UNG/UDG技术，显著降低扩增产物的污染，国内几乎所有获批的新冠检测试剂盒均采用了UNG防污染技术。我们重点关注的是PCR扩增管的密封性问题。正常情况下，我们看上去管子是盖的很紧，而PCR扩增过程是一个温度不断变化的过程，高温能达到90多度，如果PCR管密封不严，扩增过程中管盖可能会崩开或有炸管声音，还会造成PCR反应液蒸发，管内体积减少将直接影响结果，且会成为一个污染源。是的，这么一个小小的管子，就是如此重要。任何一个小的操作环节都会对结果造成影响。对于PCR实验室，操作人员是一定要严格执行标准操作规程的。

像试剂污染，也说明人的操作行为是很关键的。那么该怎么更好解决试剂污染呢？

可能有朋友说，可以尽量减少人工操作环节，将PCR试剂直接单人份分装。这个方法是不错的，PCR试剂小量分装，可以减少反复冻融、重复取样次数和反复使用过程中的试剂污染。但目前，普通的PCR尚不能做到单人单管，而且扩增试剂大多为-20℃保存，存在反复冻融的问题。因此，这是一个保存条件的改进问题。

其实，我们还有非常多细节操作是可以防污染的，例如：

·在操作中勤换手套；

·吸头装上滤芯才能用；

·在PCR试验中加入内标、阴阳性对照等质控，监测检测结果等等。

污染，是 PCR 实验室出现实验假阳性、结果不可信、研发不可靠的重要推手。
在最初开展PCR实验室的时候，应最大程度的降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现，在前期的实验室设计及日常实验室管理和操作中，就需要进行合理的实验室规划以及严格执行实验室SOP，把污染的可能性扼杀在摇篮中。