PCR实验室分区隔离原因(PCR实验室污染怎么办)
时间:2022-07-17 11:20:00 作者:网络 分类:行业资讯 浏览:37次

为什么PCR实验室要分区隔离?

  依据国家法规,在专业的PCR实验(比如临床PCR检验实验室)室通常需要做到四区隔离(或至少是三区隔离)的要求。

  一般常见的三区指的是:

  1.试剂配制区:PCR反应系统配制区。

  2.标本处理区:包括扩展模板的制备,也就是我们经常提取DNA的地方;3.PCR扩增和产品分析区域:PCR扩增区域,也是凝胶电泳分析扩增产品区域。

  如果细分PCR扩展区和产品分析区,则为典型的四区隔离。四区隔离的主要目的是防止气溶胶在各PCR区域之间流动。为了避免相互污染,可以为不同区域设置正负压:

  1.试剂准备区(一区):最干净的区域,保持微正压,防止外部空气进入隔离污染源。此外,阴性模板应添加PCR管并覆盖在该区域,严禁在该区域打开。储存带有DNA模板的离心管;

  2.增加DNA模板(ⅱ区):保持微负压,确保内部空气不泄漏,避免阳性模板的气溶胶污染外部环境。

  3.扩增及PCR产品分析区(三区):保持微负压,使内部空气不泄漏,避免扩增产物的气溶胶污染外部环境。

  在进入PCR实验室时,需要遵循一个方向进行操作不能逆向进行。

  否则,可能会产生气溶胶污染和假阳性结果!因此,在PCR实验室投入使用之前,必须先通过国家授权的检测机构进行检测,取得PCR实验室检测合格报告,然后在正常使用前进行彻底消毒。

PCR实验室污染怎么办?

  在生物实验室中,污染总是不可能预防的,安静的,虚假的阳性结果使无数的实验室人员疯狂和崩溃。如何避免实验室污染是首要任务。大多数生物学实验都是基于细胞、分子和蛋白质水平的微观实验。这些微样本对外部环境的影响很敏感,环境中的杂质污染。试剂和仪器的交叉污染。产品气溶胶污染等,将对实验结果产生负面影响。

  首先,我们需要了解哪些常见的污染源?

  交叉污染样本?试剂交叉污染?克隆颗粒污染?PCR扩张产品污染?气溶胶污染。

  如何防止PCR实验室污染?

  (一)实验室分区合理。

  实验室各工作区的实验用品,包括移液器,应专门使用。如果可能,PCR试剂应放置在配有紫外线灯的层流工作台(如生物安全柜和超净工作台)中。PCR专业微量离心机应放置在工作台内。一次性手套。每个范围内的液体转移器和其他必要物品。

  (二)实验操作正确。

  ①PCR试剂和模板的操作应严格按照要求进行,样品应缓慢,尽量一次完成,避免多次吸烟,避免交叉污染或气溶胶污染。在实验过程中,手套应经常更换。进出不同区域或模板后,应及时更换手套。

  ②配备PCR试剂的微量离心管应在打开前进行瞬时离心(约10秒),将管壁和管盖上的液体抛到管底,以减少污染手套或添加样品的机会。打开管道的动作要轻,防止管道中的液体溅出或形成气溶胶,造成污染。

  ③同时进行多个PCR反应时,应制备主反应混合物,然后将其分装到PCR反应管中。zui后,添加样品核酸模板,以减少繁琐的单次添加操作造成的污染。

  (三)实验仪器和试剂。

  ①实验室配制的试剂,如去离子水、缓冲液等,在使用前应进行高压灭菌或过滤灭菌。

  ②单独包装PCR试剂:所有PCR试剂均应单独包装,以减少重复取样次数,并保存在-20℃。此外,PCR试剂。PCR反应液应与样品和PCR产品分开保存,不得放在同一个冰箱或冰箱中。

  ③所有吸头、反应管等应一次使用,使用前应进行高压处理。如果条件允许,最好使用带过滤器的枪头。

  ④每个工作区域的移液器要有标识,要固定使用,不能交叉使用。

  (四)实验设计。

  实验设计应遵循实验室内部质量控制的有关规定,至少在实验中:

  ①设置目标DNA阳性对照反应。实验前应在实验室的其他位置进行目标序列的适当稀释,以防止目标DNA的浓缩溶液被带到实验室进行PCR的特殊位置。

  ②设置PCR试剂阴性对照和目标DNA阴性对照。

  实验室的合理设计与建设是顺利进行PCR实验的基础和保障,不合理的规划设计给后期实验的进行带来很多麻烦,从源头杜绝实验的麻烦,需要进行专业的学习。在这里提醒大家,PCR实验室检测是要有资质第三方检测公司检测,并且提供合格的检测报告,这样的实验室才能起到保护操作人员,样品的作用!