PCR实验室规划设计与建设指南
时间:2022-07-18 10:40:00 作者:网络 分类:行业资讯 浏览:37次

  PCR实验室规划设计

  标准PCR实验室分为四个区域:

  N1.试剂配制区;

  N2.样品处理区;

  N3.核酸扩增区;

  N4.产品分析区;

  如果使用全自动分析仪,该区域可适当合并。

  (进入每个工作区域必须严格按照一个方向进行,不同的工作区域使用不同的工作服,如不同的颜色。工作人员离开工作区时,不得带出工作服)

  PCR实验室平面布局

  各区功能分别为

  试剂准备区:扩增试剂的制备、分装、保存。

  样品处理区:样品登记、分装、核酸提取、保存和加样。

  扩增产品分析区:扩增产品的测定、结果分析、登记及报告。

  扩增前区与扩增后区应严格分开,必须使用不同的房间,两区之间最好有一定的间隔。

  少量试剂可在样品处理区配制。

  样品处理区和试剂准备区在满足下列操作和清洁处理要求的前提下,可设置在同一房间:

  在生物安全柜内操作;

  每个实验人员。实验组分别使用自己的试剂和耗材;

  储存污染物的器皿应密封并一次性使用;

  实验前后对操作区域和共享设备进行清洁消毒。

  PCR实验室建设规划要点。

  1.主体结构:

  主体为彩钢板。铝合金型材。室内所有阴角和阳角均采用铝合金50内圆角铝,解决易污染、积尘、不易清洗等问题。结构牢固,线条简洁,美观大方,密封性好。

  2.标准三区分隔及气压调节:

  PCR过程分为三个独立的试验区:试剂准备、标本制备和PCR扩增试验。整个区域有一个整体的缓冲走廊。每个独立的试验区都有一个缓冲区。同时,通过气压调节,试剂和标本在整个PCR试验过程中免受气溶胶污染,减少扩增产品对人员和环境的污染。

  缓冲区一、缓冲区二、PCR扩增区排气扇可打开,试验区外墙和门上安装可调回风口,空气通过回风口进入室内通风。

  3.消毒:

  紫外线灯安装在三个实验区、三个缓冲区的顶部和传送窗内进行消毒。

  移动紫外线灯也设置在试剂准备区和标本制备区,对试验桌进行局部消毒。

  4.机械连锁不锈钢传输窗:

  试剂和标本通过机械连锁不锈钢(不建议使用电子连锁)传输窗口传输,确保试剂和标本在传输过程中不受污染(人物分流)

  5.地面。

  地面建议采用聚氯乙烯卷材地面或自流平地面,完整性好。易于清洁,耐腐蚀。无条件的,水磨石地面或大瓷砖(至少800mm×800mm)接缝应小于2mm。

  6.照明。

  灯具应选用净化灯具,可达到易清洗、无尘的特点。

  在施工过程中要注意。

  ●标准化的安装流程和全面的服务流程。

  ●严格按照规范科学设计的安装流程。

  ●安装前需要确定以下安装条件,如:电源电压、电源进线位置、电话网线进线位置、进水水压、安装空间相对较小、地面平整度、通风孔、进水管、下水管位置等。、理想状态的空间尺寸和通风口尺寸。

  设计要点

  PCR实验室可以是分散或组合的。完成一组PCR实验通常需要四个实验过程:试剂准备、样品处理、核酸扩张和产品分析。如果需要实验过程,还应增加样品破碎过程。

  一、分散PCR实验室。

  所谓分散PCR实验室,是指完成上述实验过程的实验室相距较远,布局分散。对于这种布局形式的PCR实验室,由于不易相互干扰,无需特殊条件。

  二、组合PCR实验室。

  所谓组合形式PCR实验室,是指完成PCR四个实验过程的实验室相邻布局,形成独立实验区的形式。对于组合形式的PCR实验室,由于各实验室的集中布局,容易相互干扰,因此对整体布局和屏障系统有一定的要求。每个房间都在入口处设置一个缓冲室,以减少室内外空气交换。

  一些经验:

  试剂制备室和样品处理室应为微正压,防止外界含有核酸气溶胶的空气进入,造成污染;

  通过控制进风量大于排风量,可达到正压效果。

  核酸扩增室和产品分析室应为微负压,防止含有核酸的气溶胶扩散污染试剂和样品,通过控制排气量大于进气量达到负压效果。

  理想情况下,PCR实验室缓冲室可设置正压,使室内空气不流向室外,室外空气不流向室内。PCR实验室进气由原中央空调控制,要求中央空调出风口安装在指定点,地面铺设后高度为2600mm。

  如果使用荧光PCR仪,扩增室和产品分析室可以合并。

  如果房间深度允许,可以设置PCR内部专用走廊。需要指出的是,在减少室内外空气交换方面,缓冲房比专用走廊更有意义。

  各区域之间应有单向实验流程、物流、人流和气流,形成单向工艺的保护屏障,避免实验之间的相互干扰,防止核酸气溶胶对实验过程造成污染,产生假结果。

  实验室墙体,包括天花板,应结构牢固,气密性好;所有阴角应采用弧形线条过渡;墙体内壁干净,无吸附、耐腐蚀、易清洗消毒;地面材料应满足无缝、无渗漏、干净、耐腐蚀的要求。

  PCR实验室主要设备

  试剂准备区。

  仪器设备主要包括冰箱、超净平台、加样器、混匀器、平衡和离心机、加样器、平衡除特殊外,还应定期校准。试剂分装应在超净平台上进行扩增反应。混合物应与分子生物学进行比较。试剂准备好后,应进行质量检查:一是是否有污染。二是检测试剂的扩增效果。

  标本制备区。

  仪器设备主要包括生物安全柜、加样器、离心机、温育器、混匀器等。

  扩增区

  扩增区的主要仪器是核酸扩增器、超净台、微量取样器、离心机和移动紫外线灯。扩增器需要校准。并配备UPS电源,防止电压波动对扩增效果的影响。

  分析区

  本区域使用的仪器设备包括酶标记仪、洗板机、取样器、水浴箱等洁净实验区的缓冲区,部分面积不得超过主实验室的八分之一,有规定。

  PCR实验室不容忽视的琐碎设计

  1.实验室空调通风系统设计及压力控制。

  PCR实验室没有严格的净化要求,但为了避免各实验区之间交叉污染的可能性,应采用全排气的气流组织形式。同时,严格控制输送和排气,确保各实验区的压力要求。

  2.污染防治。

  PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中,常见的污染类型有以下几种物的污染;天然基因组DNA的污染;试剂的污染和标本之间的污染。一旦发生污染,实验必须停止,直到找到污染源,实验结果必须无效,需要重新实验。因此,围绕实验室寻找污染源既耗时又繁琐,浪费人力物力。因此,要避免污染,首先要预防,而不是排除。

  严格管理PCR实验室不可或缺。

  (1)严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进出实验室。如果条件允许,应设置独立通道和进出整个实验区的门;

  (2)尽量减少实验区不必要的行走,以减少交叉污染的可能性。

  (3)扩增产品分析区是扩增产品污染的主要来源。废液不能倒入实验室。消毒剂浸泡消毒后,必须远离实验室。吸头等一次性材料也应用消毒剂浸泡消毒,如焚烧;

  (4)扩展产品分析区可能使用一些可能引起基因突变和有毒物质的物质,应特别注意实验人员的安全保护。3.5实验室配套设施是保证实验工作的必要条件,应根据不同实验室内容配备相应的设备和仪器,如超净工作台、离心机、取样器等。

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